前体物质对辅酶Q_(10)生物合成的影响

首次研究了以辅酶Q10 (CoQ10 )主要侧链供给前体物质———茄尼醇和醌环供给前体———羟基苯甲酸和辅酶Q0 对粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespromb 2 1794 - 2 3) 生产CoQ10 产量的影响,并对前体的转化工艺进行了初步研究。确定了适宜于粟酒裂殖酵母生长及高转化前体生成CoQ10 的条件为:酵母在2 8℃下,2 2 0r/min于发酵培养基中培养18h后,加入0 5 g/L茄尼醇继续发酵培养18h ,进行前体转化反应。结果表明,单独添加茄尼醇能达到最大产量33 1mg/L ,比对照样品增加了91% ,任2种前体物质共同添加都要比单独添加茄尼醇时产量低。茄尼醇和CoQ0 共同添加时,单位细胞胞外辅酶CoQ10 的产量达到最高的1 35mg/g ,比对照样品增加了117%。     

枸杞多糖-4的提取、分离及其对雌性下丘脑损伤性肥胖小鼠的减肥作用

提取、分离了枸杞多糖-4,并研究了其对雌性下丘脑损伤性肥胖小鼠的减肥作用及其作用机制。雌性下丘脑损伤性肥胖小鼠模型造型后分别以20、40和60mg/(kg·d)的剂量连续灌胃30d后,称量体重,测量体长,眼球取血处死,称量全身脂肪重量,计算李氏指数和脂肪指数,测定血脂水平,将脂肪组织固定、染色后400倍显微镜下记数单个视野内脂肪细胞个数,测定脂肪组织中AccmRNA含量。结果表明,枸杞多糖-4可显著降低雌性下丘脑损伤肥胖小鼠的体重和脂肪指数;摄入适当剂量的枸杞多糖-4可显著降低血清TC和TG的含量,提高血清HDL含量;并可显著减小脂肪细胞大小和增加脂肪组织内AccmRNA的含量。表明枸杞多糖-4可通过调节机体的能量代谢达到降脂减肥的作用。     

促进剂对辅酶Q10生物合成的影响

目的研究不同的添加物对辅酶Q10发酵合成的影响。方法辅酶Q10用皂化法提取,高效液相法检测。结果添加与辅酶Q10的合成有关物质如对羟基苯甲酸、胡萝卜汁、西红柿汁及烟叶,均能提高辅酶Q10的产量,分别提高6.3%、9.0%、18.1%、12.1%。     

吐温80增溶-紫外分光光度法测定辅酶Q_(10)脂质体的载量及包封率

在辅酶Q10脂质体的制备过程中,载量和包封率是评价辅酶Q10脂质体的2个重要质量指标。采用表面活性剂吐温80对辅酶Q10脂质体进行增溶,再结合紫外分光光度法测定其载量和包封率。研究结果表明,辅酶Q10浓度在2.5～50μg/mL范围内,吐温80增溶法与以乙醇为溶剂的反相高效液相色谱法以及紫外分光光度法有良好的相关性(R2>0.999);空白脂质体中,辅酶Q10的加样回收率在(98.26±0.63)%～(101.20±1.28)%之间,相对标准偏差RSD<2%(n=6);该法用于测定辅酶Q10脂质体中总辅酶Q10含量的RSD<5%(n=6);不同载量[(3.22±0.01)%～(13.62±0.31)%]的辅酶Q10脂质体的包封率均高于95%(RSD<1%,n=6)。与以乙醇为溶剂的反相高效液相色谱法以及紫外分光光度法相比,该法具有准确可靠、简单、重现性较好的优点。     

基于葡萄糖激酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的NADPH高效再生

目的:构建辅酶NADPH高效再生的基因工程菌,获得辅酶NADPH高效再生的最佳工艺条件。方法:利用基因工程技术将辅酶NADPH再生关键酶的基因glk和zwf导入到大肠杆菌BL21中,实现辅酶NADPH循环高效再生,并优化辅酶NADPH再生的工艺条件。结果:成功构建了含有辅酶NADPH再生关键酶两个基因的重组大肠杆菌BL21/pETDuet-1-glk-zwf;通过正交设计优化试验,获得重组工程菌株产辅酶NADPH的最佳工艺条件是:诱导温度20 ℃、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷浓度0.25 mmol/L、接种量1.5%、装液量100 mL/250 mL。在此条件下进行1 L发酵摇瓶诱导培养48 h,辅酶NADPH产量高达151.79 μmol/L。结论:研究结果为辅酶NADPH循环再生提供了良好的理论基础。     

辅酶Q10在心血管病方面的研究及进展

辅酶Q10存在于以人类为主的高级动植物线粒体的内膜中，在呼吸链中起传递氢体作用，对许多酶有激活作用，作为代谢性强心剂已得到广泛的应用。本文主要阐述辅酶Q10在心血管方面的研究发展状况。     

人工神经网络与遗传算法耦合法优化辅酶Q_(10)发酵培养基

为了提高类球红细菌F3-40辅酶Q10的发酵效价,对发酵培养基进行优化。通过单因子优化实验确定培养基中4种重要成分的浓度范围:葡萄糖25～40g/L、味精5～9g/L、硫酸铵3～7g/L、玉米浆粉5～9g/L。在此基础上采用均匀设计实验对4种成分进行组合优化,分别采取二次多项式逐步回归分析法、人工神经网络与遗传算法耦合法对均匀设计实验结果进行优化分析。结果表明,人工神经网络与遗传算法耦合法取得较好的优化效果,显著提高辅酶Q10的发酵水平,最终辅酶Q10的发酵水平达到245mg/L,比二次多项式逐步回归分析优化法(221 mg/L)、单因子优化实验(211 mg/L)、优化前(150 mg/L)分别提高了10.86%,16.11%,63.33%。     

白藜芦醇在酿酒酵母中的组合表达

将克隆自拟南芥的4cl基因和巨峰葡萄的rs基因,利用降落重叠延伸PCR的方法,成功构建了含有G418抗性筛选标记的酵母表达载体pRS42K-4CL以及含有潮霉素抗性筛选标记的酵母表达载体pRS42H-RS。采用LiAc/SS carrier DNA/PEG法将含有目的基因的2个载体共同转化至酿酒酵母工业菌株EC1118中,通过PCR及酶切鉴定等方法验证重组工程菌。以对香豆酸为底物,将获得的酿酒酵母工程菌于YPD液体培养基中发酵(25℃,150 r/min,96 h),发酵液用乙酸乙酯抽提后采用高效液相色谱(HPLC)法进行检测,其结果显示发酵产物中白藜芦醇的含量为0.78 mg/L。这表明,拟南芥的4cl基因与巨峰葡萄的rs基因在酿酒酵母工程菌中成功得到了表达,并且表达产物利用对香豆酸为前体物质合成了目标产物白藜芦醇。该研究为进一步实现白藜芦醇在酵母中的工业化生产奠定了基础。     

北京博泰世纪科技发展有限公司

辅酶Q10（Coenzyme Q10）是目前国内外市场相当紧缺的医药原料，市场价格高达每公斤30000元，而成本为每公斤6000元以下。本合成工艺路线短、生产周期短，成本较低，为日本工业化生产路线，具有很高的工业化水平。产品符合日本药典．IP14标准。